一、燙傷感染模型構(gòu)建流程

1. 材料準(zhǔn)備

• 動(dòng)物：BALB/c或C57BL/6小鼠（8-10周齡，雄性更佳）

• 病原體：銅綠假單胞菌PAO1或臨床分離株（OD600=0.6時(shí)約1×10^8 CFU/mL）

• 設(shè)備：

• 定制銅質(zhì)燙傷儀（直徑1cm，重量30g）或可控溫?zé)崴h(huán)系統(tǒng)

• 紅外測(cè)溫儀、無菌活檢穿孔器

• 耗材：無菌透明敷料（Tegaderm?）、苦味劑（防舔舐）

2. 燙傷創(chuàng)面制作

1. 麻醉與備皮：

• 異fu烷麻醉，背部剃毛，脫毛膏處理殘留毛發(fā)。

• 碘伏+75%酒精消毒皮膚3次。

2. 標(biāo)準(zhǔn)化燙傷：

• 干熱法：預(yù)熱的銅棒（100℃）接觸皮膚10秒（Ⅲ度燒傷，需病理確認(rèn)全層皮膚壞死）。

• 熱水法：90℃水浴中背部皮膚接觸8-10秒（需固定小鼠體位）。

3. 創(chuàng)面確認(rèn)：

• 蒼白無出血、無痛覺反應(yīng)提示全層燒傷。

• 立即腹腔注射生理鹽水1mL（預(yù)防休克）。

3. 細(xì)菌接種與感染維持

1. 菌液制備：

• 離心收集對(duì)數(shù)期細(xì)菌，PBS調(diào)整至5×10^6 CFU/50μL。

2. 接種方法：

• 用移液器將50μL菌液均勻滴加至燙傷創(chuàng)面。

• 覆蓋透明敷料（模擬濕潤(rùn)環(huán)境，促進(jìn)生物膜形成）。

3. 術(shù)后管理：

• 單籠飼養(yǎng)，每日更換敷料，觀察創(chuàng)面滲出/壞死。

二、燙傷感染模型構(gòu)建關(guān)鍵參數(shù)優(yōu)化

三、評(píng)估方法

1. 創(chuàng)面感染嚴(yán)重度評(píng)分

2. 定量檢測(cè)

• 細(xì)菌載量：

1. 剪取創(chuàng)面組織（含周圍5mm正常組織）。

2. 勻漿后梯度稀釋，接種LB平板計(jì)數(shù)CFU/g組織。

• 組織病理：

• HE染色：中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)、組織壞死深度。

• Gram染色：觀察細(xì)菌分布。

• 生物膜檢測(cè)：

• 掃描電鏡或共聚焦顯微鏡（SYTO9/PI染色）。

3. 全身影響監(jiān)測(cè)

• 體重下降（>20%需人道終點(diǎn)）。

• 血液CFU計(jì)數(shù)（判斷是否發(fā)生敗血癥）。

四、注意事項(xiàng)

1. 燙傷均一性控制：

• 使用固定壓力燙傷儀（如50g/cm2壓力）。

• 同一實(shí)驗(yàn)員操作以減少變異性。

2. 感染劑量驗(yàn)證：

• 預(yù)實(shí)驗(yàn)檢測(cè)不同劑量下72h創(chuàng)面CFU（理想范圍1×10^5-10^6 CFU/g）。

3. 鎮(zhèn)痛管理：

• 術(shù)后布tuo啡諾（1mg/kg SC q12h）減輕疼痛。

4. 糖尿病模型適配：

• db/db小鼠燙傷后感染率更高，但需延長(zhǎng)愈合觀察期。

五、模型優(yōu)化策略

1. 混合感染模型：

• 聯(lián)合接種金黃色葡tao球菌（1×10^5 CFU）和銅綠假單胞菌（1×10^6 CFU）模擬臨床復(fù)雜感染。

2. 免疫抑制處理：

• 環(huán)lin酰胺（150mg/kg IP）預(yù)處理增強(qiáng)感染易感性。

3. 生物膜強(qiáng)化：

• 延遲抗生素治療至接種后48h，促進(jìn)生物膜形成。